GMP无菌实验室的运行及管理

GMP无菌（fungus)(意思:没有活菌)实验室的运行及管理

一、室内环境管理

无菌（fungus)实验室设有无菌操作间、缓冲间和更衣间，无菌操作间洁净度达到10000级，超净台洁净度达到100级且室内温度应保持在20~24℃，湿度保持在45%~60%[1]，此设置不仅满足人体舒适度且又不利于室内微生物(Micro-Organism)的生存。加工厂净化车间.净化厂房墙、顶板材一般多采用50mm厚的夹芯彩钢板制造，其特点为美观、刚性强。圆弧墙角、门、窗框等一般采用专用氧化铝型材制造，地面可采用环氧自流坪地坪或高级耐磨塑料地板，有防静电要求的，可选用防静电型。初效、中效过滤器(作用:过滤杂质等)需要6个月更换1次，高效过滤器需要每年更换1次，以保证室内洁净度达到标准。紫外灯达到使用寿命(lifetime)会影响消毒灭菌的效果，应定期检查更换，同时应加强其他指标的监测，如洁净度、细菌菌落数、静压差和风量等。

二、物流管理

经过γ射线灭菌的细胞培养瓶、培养皿、移液管、离心管等用1000mg/L浓度的消毒液彻底"擦拭(cleanse)

"器材表面，消毒后放置于传递窗中，紫外灯照射30min后方可带入实验室。高压消毒的器材如止血钳、治疗盘、离心套管等要用包布包裹2层，经高压蒸汽灭菌和烤箱烘干后使用。使用前应检查物品包裹内外各种监测指示剂是否符合要求，再决定使用。贮存器材可放入无菌室的柜橱内，若超过有效期应重新灭菌。进包装间要严格洗手，穿工作衣、戴口罩、帽子，包装前检查包布、治疗巾，应清洁低湿无破损，做到一用一洗一消毒，各类器材应光洁无锈、性能完好齐全。

外用3M化学指示胶带封贴并注明品名、包装者、查对者、灭菌期及有效使用期，各类灭菌包包扎应松紧适度、整齐，减少各种污染的机会。电子净化车间高温车间降温：玻璃制造厂灯工岗位降温，玻璃纤维生产车间降温，陶瓷生产车间降温，产品加工车间降温，皮革加工，化工电子，学校，金属铸造车间降温。食用菌养殖棚，养殖场，种植场降温，增温。烘焙车间降温除湿等。所有实验（experiment)室器材需在最外层传递窗中用紫外灯照射30min后方可带入缓冲间。灭菌包需在缓冲间内剥去最外层包布后方可带入无菌(意思:没有活菌)操作间。在无菌操作间内剥去内层包布后摆放到固定位置（position )备用。实验室内各种器材要排放有序，定期巡查，补充基数。为保证洁净度，应严禁堆放杂物，以防污染。污敷料及垃圾废液等应分别放入专用废液缸和污物桶中，待操作完毕后移出实验室。彻底（thorough)清洁室内物品及地面，减少污物在室内的停留时间。

对已污染或疑似污染培养基、细胞因子等应立即丢弃。食用菌净化车间快速实现空间环境净化,是传统空气净化投资的20%，又能达到百级净化标准，不用任何化学药物、没有化学药剂残留。一年节省的消毒药剂，即可以买一台设备，适于标准化食用菌厂和栽培户冷却室、接种室、菇房消毒。实验（experiment)室设定了单独的阳性工作区域，包括阳性无菌操作间、缓冲间和更衣间。阳性工作区域与阴性工作区域完全隔离，防止肝炎病毒通过血液及相关物品等感染阴性患者回输的细胞，防止患者通过细胞回输感染乙肝病毒。工作人员进入阳性区域后，不得再进入阴性区域，阳性间每次使用的洗手衣需加入1000mg/L浓度消毒液，洗涤晾干以备下次使用，每次进入阳性间所着一次性隔离衣在用后应弃于阳性间垃圾袋中，阳性液体污物应瓶装密封后放入阳性间医疗垃圾袋中。阳性医疗垃圾袋从阳性间的传递窗中传出，放入专用医疗垃圾桶中，由院内专人负责回收。

三、运行制度管理

工作人员于每次实验操作前30min打开实验室空气净化系统和紫外灯。如果实验室长期不用，需要在实验前3h打开空气净化系统，以提高空气洁净度。在潮湿季节使用时，打开紫外灯时间需适当增加，以加强消毒效果，保证实验质量。进入无菌实验室的人员要严格着装，穿着经严格高压蒸汽灭菌过的洗手衣、隔离衣、口罩、帽子及用10g/L过氧乙酸溶液(acid solution)浸泡后晾干的拖鞋。着装程序如下：进入第一更衣间后脱掉外衣换一更拖鞋;随即进入第二更衣间，穿戴经高压蒸汽灭菌的一次性口罩帽子，着洗手衣换二更拖鞋，带无菌橡胶手套;进入第三更衣间后着隔离服，换三更拖鞋，之后方可进入无菌操作间操作。

保持实验（experiment)室相对密闭状态，严格控制人员进出，必要情况下需要工作人员互相沟通协调时，可通过房间对讲电话联络，将工作人员出入次数降到最低，减少不必要的涡流形成，使室内的气压始终处于正压状态。各项操作要集中，操作过程要轻稳，不能在实验室抖动衣物布类，以防止微粒在室间飞扬，保证室间空气的洁净。实验室人员进入无菌操作间应衣帽整洁、修剪指甲，严格执行无菌技术操作。一切操作必须在百级净化的超净工作台内进行，超净工作台在使用前需打开其紫外灯辐照灭菌30min以上，并同时打开超净工作台进行吹风。实验中应保持无菌操作，拿取物品不要跨过无菌面;培养瓶不要过早打开，对于已开瓶口者要尽量避免垂直放置;吸管等不能触及瓶口，以防特殊结构:荚膜、鞭毛、菌毛污染或细胞的交叉感染。每次操作过程中留取定量样品进行细菌、真菌、支原体检测，以巡查无菌操作的可靠性及细胞是否污染。操作完毕后应及时清理无菌实验室。组织实验室全体人员进行理论学习，明确无菌实验室工作原理、环境要求，设置严格的工作流程，明确分工并强化责任技师有效的合作配合意识。

四、卫生清洁管理

清洁工作应在实验室空气净化系统运行中进行，清洁工具采用不掉纤维的织物材料制作。一切清洁工作必须采用湿式打扫，每周进行1次彻底清洁。需用1000mg/L含氯消毒液擦拭房间桌、椅、墙壁、天花板以及转凳、显微镜等固定在实验室内的物体。用体积分数为75%的酒精擦拭培养箱、超净台和紫外线（Ultraviolet rays)灯管。地板很容易藏尘(如人体皮肤、毛发的脱落、布类的纤维等)、藏菌等，是室内的污染源，应在吸尘器吸除后用1000mg/L含氯消毒液擦拭。抽风、回风口也易藏尘、藏菌，应重点拆洗清洁，以确保尘埃过滤效果。卫生清洁时应用10g/L过氧(Oxygen)乙酸溶液浸泡消毒工作人员所穿的拖鞋，待晾干后再使用。每周进行彻底清洁时应将实验室内物品如移液器、移液器枪头、止血钳、治疗盘(荨荨上接第76页荨荨)以及离心机套管等进行高压蒸汽灭菌。清洁工作完成后，手术室净化系统继续运行时间一般不应少于30min。